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Home Chimica

Metodo del biureto

di Chimicamo
19 Ottobre 2022
in Chimica, Chimica Analitica
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metodo del biureto-chimicamo

metodo del biureto-chimicamo

Uno dei metodi più comuni per la determinazione delle proteine totali contenute in un campione è il metodo del biureto.

Sommario nascondi
1 Sintesi
2 Reazioni

Sintesi

Il biureto è un composto ottenuto dalla reazione di condensazione dell’urea che è riscaldata ad una temperatura di 180°C con eliminazione di ammoniaca:

2 H2NCONH2 → H2NCONHCONH2 + NH3

Reazioni

Quando il biureto è trattato con solfato di rame di colore azzurro in ambiente alcalino, si forma un complesso di colore viola. In esso  lo ione Cu2+ coordina, tramite il doppietto elettronico solitario presente sull’azoto quattro atomi di azoto provenienti da legami peptidici.

biureto

La reazione quindi dipende dalla presenza di legami peptidici ed è quindi positiva con i polipeptidi e quindi con le proteine.

La variazione di colore è funzione del numero di legami peptidici presenti nella soluzione. Quindi l’analisi quantitativa delle proteine può essere effettuata tramite metodi spettrofotometrici tenendo conto che il complesso assorbe a 540 nm.

Poiché in ambiente basico lo ione rame (II) precipita come idrossido Cu(OH)2 viene aggiunto il sale di Rochelle per stabilizzare lo ione rame. Inoltre è aggiunto ioduro di potassio onde evitare la riduzione dello ione rame.

Dopo aver preparato la soluzione del reattivo  aggiungendo 3 g di solfato di rame pentaidrato e 9 g di sale di Rochelle a 500 mL di  una soluzione 0.2 M di NaOH si aggiungono 5 g di KI. La soluzione risultante è portata a volume di 1 L con NaOH 0.2 M.

Per ottenere la retta di taratura si prepara una soluzione di albumina siero di bovino con concentrazione 10 mg/mL e da questa si preparano soluzioni più diluite. Si misura l’assorbanza di ciascuna soluzione a 540 nm e si costruisce la retta di taratura.

  Alchilazione delle ammine

La concentrazione delle proteine in una massa nota di campione incognito è determinata conoscendo la sua assorbanza interpolandone graficamente il valore.

Tags: ammoniacaassorbanzalegami peptidicimetodi spettrofotometriciproteinereazioni di condensazionesale di Rochellesolfato di rameurea

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Il Progetto Chimicamo

Massimiliano Balzano, ideatore e creatore di questo sito; dottore di Scienza e Ingegneria dei Materiali presso l’Università Federico II di Napoli. Da sempre amante della chimica, è cultore della materia nonché autodidatta. Diplomato al Liceo Artistico Giorgio de Chirico di Torre Annunziata.


Maurizia Gagliano, ha collaborato alla realizzazione del sito. Laureata in Chimica ed iscritta all’Ordine professionale. Ha superato il concorso ordinario per esami e titoli per l’insegnamento di Chimica e Tecnologie Chimiche. Docente.

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